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紫外线主要作用于微生物的DNA，通过破坏DNA结构，使之失去繁殖和自我复制的功能，还可使空气中的氧电离产生具有杀菌作用的臭氧，从而达到消毒的目的。照射方式有：常规照射、近距离高强度照射、箱内照射。

紫外线消毒的局限性就在于只能用于无人状态下室内空气的消毒，消毒时需关闭门窗，照射后房间应通风换气，此时，室内空气的消毒状态便逐渐被破坏，大约20分钟后将回到原有状态，因此，紫外线消毒更适合于无菌操作前室内空气的消毒及传染病的终末消毒：如接诊传染病的诊室、传染病病房、多重耐药菌患者出院以后的终末消毒等，以彻底杀灭室内的病原微生物，防止病菌的扩散与传播。